基本信息中文名称[色氨酸⁴]‑肯普肽荧光型 PKA 底物肽三字母序列Leu‑Arg‑Arg‑Trp‑Ser‑Leu‑Gly‑OH单字母序列LRRWSLG‑OHCAS80224‑16‑4氨基酸数目7 aa分子式C₄₀H₆₆N₁₄O₉分子量887.05 Da理论等电点 pI≈11.7强碱性多肽 修饰N 端游离氨基C 端游离羧基母肽 Kemptide 第 4 位 Ala 替换为 Trp磷酸化位点为Ser5含 Trp无 Cys、Met无二硫键常见 TFA 三氟乙酸盐PMC理化性质白色冻干粉三氟乙酸盐水溶性优秀可溶于水、稀乙酸、中性激酶缓冲液。 引入 Trp 色氨酸具备内源荧光280 nm 紫外吸收Trp 对光照敏感全程避光操作无甲硫氨酸、半胱氨酸无氧化、二硫键风险线性柔性七肽。 磷酸化后 Trp 荧光强度发生显著改变可不用同位素通过荧光变化检测激酶与磷酸酶活性碱性条件肽键易水解。结构式生物学背景与作用机理经典 cAMP 依赖性蛋白激酶PKA底物4 位 Ala 突变为 Trp保留 PKA 识别与磷酸化能力Ser5 为磷酸化位点。 PKA 催化 Ser5 磷酸化肽段的 Trp 微环境改变荧光信号发生位移 / 强度变化磷酸化产物又可作为蛋白磷酸酶的底物去磷酸化后荧光恢复。 利用这一荧光特性可以建立非放射性荧光检测体系同时测定 PKA 激酶活性与蛋白磷酸酶活性规避 ³²P 同位素实验。 两个 Arg 残基是 PKA 识别的关键碱性基序突变 Trp 仅引入荧光报告基团不破坏激酶结合口袋识别。科研应用领域PKAcAMP‑依赖蛋白激酶体外酶活检测非同位素荧光法激酶实验蛋白磷酸酶活性测定跟踪肽段去磷酸化荧光变化高通量筛选 PKA 激酶抑制剂、磷酸酶抑制剂蛋白激酶 A 底物构效关系 SAR对比原型 Kemptide细胞裂解液中 PKA 功能定量分析。溶解与储存规范溶解超纯水或激酶缓冲液配制母液必须避光保护 Trp现配现用避免强碱高温。冻干粉‑20 ℃密封干燥避光长期保存分装单次小份避免反复冻融有效期约 2‑3 年。溶液分装‑80 ℃冻存‑20 ℃短期存放4 ℃仅可短期数天。 仅用于科研实验不可用于人体临床。