本文摘要介绍人原代肝细胞PHH、Kupffer细胞、星状细胞、肝内皮细胞及配套专用培养基为药物代谢、肝毒性检测、肝病研究提供可靠的细胞模型解决方案。关键词人原代肝细胞、PHH、人肝非实质细胞、Kupffer细胞、肝星状细胞、肝内皮细胞、肝细胞培养基、药物肝毒性检测、MASH模型、LifeNet Health一、进口人原代肝细胞选型主要标准人原代肝细胞是药物研发中评估代谢稳定性、肝毒性和药物相互作用的金标准模型。优质进口肝细胞通常需要满足复苏后存活率高、贴壁能力强、保留完整CYP450酶活性和代谢功能、批次间性能稳定、实验重复性好、提供详尽质检报告和供体信息以及支持疾病模型研究等核心要求尤其是在NAFLD、NASH、MASH等肝病研究和药物肝毒性检测场景中细胞模型的来源、功能稳定性和表征信息会直接影响实验结果的可靠性。LifeNet Health凭借严格的供体筛选、成熟的分离技术和完善的质量控制体系成为科研和制药领域备受信赖的品牌。对于需要开展药物代谢、肝毒性检测、MASH模型研究及体外肝脏模型开发的研究人员也可以进一步参考LifeNet Health人原代肝细胞及配套培养基相关资料https://www.mine-bio.com/LifeNet_PrimaryCells_Medium/?utm_sourcecsdnutm_mediumreferralutm_campaignlifenet_article二、LifeNet Health肝脏细胞产品核心优势LifeNet Health肝脏细胞产品的优势首先体现在丰富的细胞资源与疾病模型覆盖上。其产品可覆盖全年龄阶段包括新生儿、儿童、青少年及成人肝细胞同时可以提供健康与疾病状态细胞包括不同阶段MAFLD/MASH、脂肪肝、肝硬化等模型并可提供同一供体的同源匹配细胞如肝实质细胞、肝非实质细胞和肝组织样本便于研究人员构建更接近人体肝脏微环境的体外模型。在贴壁周期与稳定功能方面LifeNet Health可提供短期贴壁型、中期贴壁型和长期贴壁型人原代肝细胞。短期贴壁型可稳定培养1-4天适用于快速代谢实验中期贴壁型可稳定培养5-9天支持酶诱导研究、器官芯片等多种培养体系长期贴壁型可稳定贴壁长达14天适合慢代谢研究和长期毒性实验需求。在质量控制与质检信息方面每批细胞均经过全面表征检测并随货提供完整的质检报告CoA内容包含细胞存活率、产量、贴壁率CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP3A4等主要代谢酶活性112种代谢酶和肝病相关基因分型供体病史、BMI、肝功能指标及病理学评分以及细菌、真菌、支原体和传染病检测结果如HIV、HBV、HCV等。LifeNet Health同时提供经优化的肝细胞专用复苏、铺板和维持培养基可帮助提升细胞存活率和功能稳定性。对于原代肝细胞这类对培养条件较为敏感的细胞类型配套培养基和规范操作流程往往是保证实验成功率的重要环节。三、全系列肝脏细胞产品详解3.1 人原代肝细胞PHH人原代肝细胞是药物研发中普遍应用的细胞模型LifeNet Health提供多种类型以满足不同实验需求。成人悬浮型与短期贴壁型人原代肝细胞适用于药物代谢稳定性和内在清除率测定其核心特点是通过所有主要I/II相代谢酶活性表征其中短期贴壁细胞可稳定培养1-4天适合早期药物代谢实验和快速筛选场景。成人中期与长期贴壁型人原代肝细胞则更适合药物酶诱导、药物相互作用和长期肝毒性检测等研究。该类型细胞经过CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4诱导剂响应验证中期贴壁周期为5-9天长期贴壁周期为10-14天可为长周期药物毒性和慢代谢研究提供更稳定的细胞模型。高BMI/MAFLD/MASH肝细胞适用于非酒精性脂肪性肝病研究和脂肪肝药物筛选细胞来自不同疾病阶段供体包括脂肪变性、MASH、肝硬化等并可附带NAS评分、纤维化分期及HE/三色染色图像有助于研究人员建立更接近真实疾病状态的体外模型。新生儿、儿童和青少年肝细胞则适用于儿科药物研发和年龄相关性代谢差异研究可用于反映不同发育阶段药物代谢酶表达特征为儿科用药安全性评价及特殊人群药物开发提供参考。图1. 成人原代肝细胞左复苏后明场右培养第4天相差显微镜图像3.2 人肝非实质细胞肝脏非实质细胞占肝脏细胞总数的30%-40%在肝脏稳态、免疫调节和纤维化进程中发挥关键作用。与单一肝实质细胞模型相比将肝非实质细胞纳入研究体系有助于更真实地模拟肝脏微环境尤其适用于肝脏炎症、纤维化、免疫介导肝损伤和复杂肝病机制研究。Kupffer细胞是肝脏固有免疫细胞主要参与炎症反应和吞噬作用可用于肝脏免疫研究和炎症性肝病模型构建。该类细胞经过脂多糖LPS诱导的细胞因子响应验证但不增殖、无法传代复苏后可维持培养长达7天。人原代肝星状细胞是肝脏纤维化的主要效应细胞经免疫细胞化学鉴定纯度可进行传代培养适用于肝纤维化机制研究及抗纤维化药物筛选。人原代肝内皮细胞则主要参与调节肝脏微循环和物质交换经流式细胞术检测特异性标志物表达可用于肝脏血管生成和药物转运研究。四、配套人原代肝细胞培养基为获得理想的细胞性能推荐使用LifeNet Health专属配套培养基。原代肝细胞复苏、铺板和维持阶段对于培养基配方有不同要求合适的培养体系可帮助提高细胞复苏后的存活率、贴壁效果和长期功能稳定性。LifeNet Health提供的人原代肝细胞培养基体系覆盖复苏、铺板和维持等关键步骤可与其人原代肝细胞产品配套使用从而减少因培养条件不匹配导致的细胞状态波动。图2. LifeNet Health人原代肝细胞培养基清单五、标准化操作流程以人原代肝细胞为例在人原代肝细胞验收与储存阶段签收后应立即将冻存细胞转移至气相液氮-135℃至-190℃中储存切勿将细胞置于室温或干冰上以免标签开裂和细胞活性下降。培养基验收后HHTM、HHPM、HHCM基础液应置于2-8℃保存补充剂置于-20℃保存。在人原代肝细胞复苏过程中建议提前20-30分钟将HHTM复苏培养基置于37℃水浴预热。随后从液氮中快速取出冻存管在37℃水浴中快速解冻90-100秒直至仅剩小块冰。用70%酒精擦拭冻存管外部后将细胞悬液转移至含49mL预热HHTM的50mL离心管中室温下100×g离心8分钟轻轻吸弃上清再加入3-5mL预热的HHPM铺板培养基轻轻重悬细胞沉淀并计数细胞确定存活率和产量。在细胞铺板与培养阶段需要参考每批次CoA的推荐接种密度用HHPM培养基调整细胞浓度再将细胞悬液加入胶原蛋白包被的培养板中。细胞接种后放入37℃、5%CO₂培养箱并按“南北向-东西向-8字形”摇晃三次使细胞均匀分布。培养前60分钟内每隔15分钟重复摇晃一次。接种后2-4小时吸出培养液更换为预热的HHCM维持培养基之后每天更换新鲜的HHCM培养基直至实验结束。六、常见问题FAQQ1LifeNet Health肝细胞的供体筛选标准是什么所有供体均经过严格筛选包括完整的病史调查、社会史调查和传染病检测。所有供体的HIV、HBV、HCV、梅毒和弓形虫检测结果均为阴性。每批细胞均提供详细的供体信息和病理学报告。Q2不同类型的肝细胞应该如何选择快速代谢实验可选择成人悬浮型或短期贴壁型酶诱导和药物相互作用研究可选择中期或长期贴壁型MAFLD/MASH研究可选择高BMI/MAFLD/MASH肝细胞儿科药物研发可选择新生儿、儿童或青少年肝细胞。Q3肝非实质细胞可以传代吗Kupffer细胞不增殖无法传代复苏后直接使用肝星状细胞和肝内皮细胞可以传代1-2次建议使用早期传代细胞进行实验。七、产品供应与技术支持上海曼博生物医药科技有限公司是LifeNet Health中国区官方供应商可提供全系列肝脏细胞产品及专业技术支持包括人原代肝细胞、肝非实质细胞及配套培养基也可提供完整的产品说明书、质检报告和操作指南并为相关实验提供技术咨询和方案优化指导。本文基于LifeNet Health公开资料由其中国提供商上海曼博生物整理用于科研信息分享、实验参考等。上海曼博生物可提供LifeNet Health人原代肝细胞、PHH、人肝非实质细胞、Kupffer细胞、肝星状细胞、肝内皮细胞、人原代肝细胞培养基、肝细胞复苏培养基、铺板培养基、维持培养基及药物肝毒性检测、药物代谢、MASH模型研究相关产品与技术支持助力药物研发、肝毒性检测、肝病机制研究及体外肝脏模型开发应用。