云克隆Luminex液相悬浮芯片技术实现固有免疫信号通路关键节点蛋白的同步定量从上游感应到下游输出一管血全链条解析固有免疫信号通路不是一条直线而是一张纵横交错的网络。IRF3、STAT1、NFκB是三条核心信号轴——分别主导I型干扰素应答、IFNg信号传导和炎症基因转录TMEM173STING是胞质DNA sensing的核心感受器XBP1是内质网应激与未折叠蛋白反应的关键转录因子SOCS3是JAK-STAT通路的负反馈制动器IL10与IP10则是通路激活后的功能输出端。要真正理解一个固有免疫应答事件——无论是病毒感染、胞内菌感染还是自身炎症——研究者需要同时回答至少五个问题①感受器被激活了吗②哪几条信号通路被打开了③转录因子入核了吗④负反馈机制启动了吗⑤功能输出是什么传统单因子检测无法回答任何一个问题——因为它们只能看到网络的“一个节点”而看不到整个“网络拓扑”。云克隆Luminex试剂盒8因子检测图近日武汉云克隆科技股份有限公司依托云克隆液相悬浮芯片Luminex xMAP与云克隆流式CBA多因子检测双技术平台正式推出IRF3、STAT1、XBP1、IL10、TMEM173、NFκB、SOCS3、IP10八因子联合检测Panel实现仅需25–50 μL细胞裂解液、组织匀浆或血清单次上样即可获得固有免疫信号通路“上游感应—中游转导—下游输出”全链条的同步定量数据。八因子的“通路全景图”这八项指标覆盖了固有免疫信号通路的完整链条上游感应层——TMEM173STING。TMEM173也称STING是胞质DNA sensing通路的核心接头蛋白是机体识别病毒DNA、胞内菌DNA和自身DNA的关键分子。当胞质中出现异常DNA时cGAS合成cGAMP激活STING进而启动下游IRF3和NFκB信号通路。TMEM173的表达水平反映了DNA sensing通路的“待命状态”——TMEM173高说明“雷达”已开机TMEM173低说明“雷达”可能关机或降解。中游信号转导层——IRF3、NFκB、STAT1。这三者是固有免疫信号通路的三大“中枢转录因子”IRF3是I型干扰素IFNα/β产生的核心转录因子在病毒感染后被磷酸化激活入核启动IFNα/β的转录。IRF3的磷酸化/活化水平直接反映“抗病毒干扰素应答”是否已被启动。NFκB是炎症基因转录的核心转录因子在TLR信号、炎症因子信号和STING信号下被激活启动TNFα、IL6、IL1b等促炎因子的转录。NFκB的活化水平直接反映“炎症基因程序”是否已被打开。STAT1是IFNg和I型干扰素信号的关键下游转录因子被JAK磷酸化后入核启动一系列干扰素诱导基因ISG的转录。STAT1的活化水平直接反映“干扰素信号通路”的传导效率。负反馈调控层——SOCS3。SOCS3是JAK-STAT通路的经典负反馈抑制因子在STAT信号过度激活时被诱导表达通过结合JAK或细胞因子受体来“踩刹车”。SOCS3的水平反映了机体对干扰素信号和炎症信号的“自我控制”能力——SOCS3高说明“刹车”正在起作用SOCS3低说明负反馈可能不足。内质网应激层——XBP1。XBP1是未折叠蛋白反应UPR的关键转录因子在内质网应激时被激活启动一系列与蛋白折叠、分泌和质量控制相关的基因。病毒感染、炎症和代谢应激都可通过内质网应激激活XBP1。XBP1的水平反映了细胞是否正在经历“内质网应激”——这是连接固有免疫与细胞应激反应的关键节点。功能输出层——IL10与IP10。这是通路激活后的“功能输出端”IL10是最经典的抗炎与免疫调节因子是机体防止炎症失控的关键负反馈信号。其水平反映了抗炎调控是否已启动。IP10CXCL10是IFNg诱导的Th1型趋化因子介导活化T细胞向炎症部位募集。其水平反映了“干扰素-趋化”轴是否已被激活以及免疫细胞募集是否正在发生。八因子同步检测将固有免疫信号通路的激活过程分解为五个可量化的层次感受器状态TMEM173→信号转导IRF3、NFκB、STAT1→负反馈SOCS3→细胞应激XBP1→功能输出IL10、IP10。应用场景从抗病毒药物筛选到自身炎症疾病在抗病毒药物研发中该Panel可同步评估候选药物对固有免疫通路的调控效果TMEM173/STING反映DNA sensing是否被激活IRF3反映I型干扰素应答是否启动NFκB反映炎症程序是否被打开STAT1反映干扰素信号传导效率SOCS3反映负反馈是否过度——为“免疫调节型”抗病毒药物的药效评价提供了从靶点到功能输出的完整证据链。在自身炎症性疾病与I型干扰素病如Aicardi-Goutières综合征、STING相关婴儿期起病血管病变SAVI等研究中该Panel可同步评估STING-IRF3-IFN轴的异常激活程度TMEM173、IRF3、STAT1、炎症通路的伴随激活NFκB以及负反馈的应对状态SOCS3——为判断“干扰素特征”的强度和性质提供多维度的分子证据。在肿瘤免疫微环境研究中该Panel可同步评估肿瘤相关炎症的信号通路激活状态NFκB、干扰素应答STAT1、内质网应激XBP1和免疫抑制IL10——为判断“冷肿瘤”与“热肿瘤”的分子基础提供通路层面的量化数据。技术实现核蛋白与分泌蛋白的“同体系检测”云克隆八因子Panel基于流式荧光发光法FLIA。值得注意的是该Panel同时包含了核转录因子IRF3、NFκB、STAT1、XBP1和分泌型蛋白IL10、IP10以及膜相关蛋白TMEM173——不同类型的蛋白在样本制备、蛋白保护和检测体系上有不同要求。云克隆针对核转录蛋白采用特殊蛋白保护缓冲液有效避免样本提取过程中的蛋白降解失活。在性能方面该Panel各指标交叉反应率低于1%检测灵敏度可达pg级回收率稳定在80%–120%批内CV10%批间CV12%。产品通过ISO 9001与ISO 13485质量体系认证。“固有免疫信号通路的研究最大的瓶颈不是‘测不准’而是‘测不全’。”云克隆产品研发负责人表示“一个通路上的七八个关键节点分散在三四套不同的检测体系中研究者根本无法获得‘通路全景’。云克隆多因子试剂国内领先就是因为我们让研究者用一管样本、一次实验看到了从‘感应器’到‘输出端’的完整通路图谱。”目前云克隆多因子检测试剂盒已覆盖7,000种检测指标涵盖细胞因子、信号通路标志物、肿瘤生物标志物等支持灵活搭配。针对固有免疫信号通路云克隆已开发了多种成熟检测组合可适配人、小鼠、大鼠等多个实验物种。